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1    犬瘟熱病毒納米抗體及其應(yīng)用

可用于檢測犬瘟熱病毒的納米抗體，所述的抗體與犬瘟熱病毒具有良好的親和性，可以極其快速地檢測出血液中犬瘟熱病毒或其N蛋白，同時(shí)能夠使得犬瘟熱病毒檢測用的配對(duì)抗體的制備變得容易，所制備的試劑盒成本更低，且更易于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸；本發(fā)明的試劑盒可以靈敏檢測犬瘟熱病毒抗原，重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，方便快捷，納米抗體生產(chǎn)成本低且易于獲得。

2    狐源犬瘟熱病毒強(qiáng)毒HBF-1株的感染性cDNA克隆及反向遺傳系統(tǒng)的建立

反向遺傳操作系統(tǒng)拯救獲得的重組病毒rHBF?1與親本病毒wtHBF?1相比具有相似的生長特性，且大小、形態(tài)與典型的犬瘟熱病毒的一致。本發(fā)明的提出為狐源犬瘟熱病毒強(qiáng)毒HBF?1株的拯救以及深入探索犬瘟熱病毒的致病致弱分子機(jī)制提供了基礎(chǔ)和技術(shù)手段。

3    用于檢測犬瘟熱病毒的抗體對(duì)及其應(yīng)用

抗體對(duì)能特異性識(shí)別犬瘟熱病毒，在抗原試紙條實(shí)驗(yàn)中最低檢測1000個(gè)TCID50/mL犬瘟熱病毒，在雙抗體夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)中最低檢測400個(gè)TCID50/mL犬瘟熱病毒，識(shí)別特異性高，且不與其他病毒反應(yīng)。

4    培養(yǎng)犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒的方法及應(yīng)用

通過生物反應(yīng)器進(jìn)行犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒的培養(yǎng)，以Vero細(xì)胞作為犬瘟熱病毒的宿主，以F81細(xì)胞作為犬細(xì)小病毒的宿主在片狀載體上進(jìn)行培養(yǎng)，生產(chǎn)得到的犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒滴度高，批間差異小，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

5    一株嵌合犬瘟熱病毒株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

將狐源犬瘟熱病毒強(qiáng)毒HBF?1的H基因替換為疫苗毒Onderstepoort的H基因，通過病毒拯救獲得了一株嵌合犬瘟熱病毒株rHBF?vacH，該病毒可在Vero?dSlam中穩(wěn)定傳代，且病毒滴度穩(wěn)定達(dá)到107.0TCID50/ml，超過親本毒株的105.0TCID50/ml，未來應(yīng)用于犬瘟熱病疫苗開發(fā)將會(huì)具有極大優(yōu)勢。

6    一種利用生物反應(yīng)器制備犬瘟熱病毒單克隆抗體的方法

該方法提高了犬瘟熱病毒單克隆抗體的效價(jià)，無需濃縮，克服了傳統(tǒng)腹水生產(chǎn)抗體的缺點(diǎn)，使抗體產(chǎn)品無雜蛋白，產(chǎn)品穩(wěn)定，批間差異小。

7    多配體蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟熱病毒復(fù)制中的應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)證明，SDC4 siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞毒性低，不會(huì)影響細(xì)胞正常存活與增殖，并且能夠明顯抑制SDC4的表達(dá)水平，病毒復(fù)制水平也明顯下降。因此，本發(fā)明的提出為犬瘟熱的防控提供了一種新的、有效的技術(shù)手段。

8    鑒別犬瘟熱病毒野毒株和疫苗株的引物、探針及應(yīng)用 

引物探針構(gòu)建的復(fù)合熒光定量PCR方法能快速、有效的鑒別犬瘟熱病毒(CDV)野毒株和疫苗株，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)。

9    一種犬瘟熱弱毒株及其制備的疫苗組合物和應(yīng)用

具有良好的免疫原性，遺傳穩(wěn)定，低毒，制備的活疫苗能預(yù)防和治療犬瘟熱，針對(duì)流行株進(jìn)行保護(hù)，并能對(duì)多種動(dòng)物進(jìn)行保護(hù)。

10    用于擴(kuò)增犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的通用引物組及其應(yīng)用

該通用引物組能夠?qū)崿F(xiàn)不同宿主來源的犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的有效擴(kuò)增，大大提高了獲得病毒結(jié)構(gòu)基因序列的效率，縮短了病毒含量極低樣品中獲得犬瘟熱病毒其他未知毒株結(jié)構(gòu)基因序列的時(shí)間。有助于明確CDV適應(yīng)細(xì)胞前后病毒各個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白核苷酸序列變異情況，追溯其變異來源及規(guī)律，為尋找犬瘟熱病毒野毒關(guān)鍵毒力位點(diǎn)提供技術(shù)手段。

11    犬用犬瘟熱、細(xì)小病毒病二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法

使用本發(fā)明的二聯(lián)滅活疫苗接種犬未見任何不良反應(yīng)發(fā)生；效力試驗(yàn)表明，單劑量接種疫苗后6個(gè)月內(nèi)，可使犬免于犬瘟熱、細(xì)小病毒病檢驗(yàn)用強(qiáng)毒的攻擊，獲得保護(hù)。本發(fā)明的二聯(lián)滅活疫苗采用犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒滅活工藝，可用于同時(shí)預(yù)防犬的犬瘟熱、細(xì)小病毒病二種疾病，實(shí)現(xiàn)“一針防兩病”，具有廣闊的應(yīng)用前景。

12    鑒別水貂犬瘟熱病毒、水貂細(xì)小病毒、水貂阿留申病毒及偽狂犬病毒的四重PCR引物組

還公開了含有上述引物組的試劑盒并建立了相關(guān)的多重PCR檢測方法。本發(fā)明建立的多重PCR檢測方法簡單，檢測速度快且批量大、特異性好、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，可以準(zhǔn)確、快速、高通量的進(jìn)行臨床樣本的檢測，也可應(yīng)用于寵物犬、雪貂及狐貍、貉病毒病的檢測。

13    犬瘟熱、犬細(xì)小、犬腺病毒、犬副流感四聯(lián)活疫苗耐熱保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用

原料易得、制備方法簡單，在配制犬瘟熱、犬細(xì)小、犬腺病毒、犬副流感四聯(lián)活疫苗時(shí)可以有效降低冷凍干燥過程中各病毒抗原的損失，可確保犬瘟熱、犬細(xì)小、犬腺病毒、犬副流感四聯(lián)活疫苗的免疫效力和長期穩(wěn)定保存。

14    犬瘟熱病毒犬細(xì)小病毒犬傳染性肝炎病毒三聯(lián)活疫苗

微生物保藏號(hào)為CGMCC No.19398的犬細(xì)小病毒疫苗株和微生物保藏號(hào)是CGMCC No.19396的犬傳染性肝炎病毒疫苗株。該疫苗株組合中的三種疫苗毒株毒力低，免疫原性良好。本發(fā)明還公開了以前述疫苗株組合為免疫原的活疫苗組合物。該疫苗組合物安全有效。

15    快速檢測犬瘟熱病毒（CDV）的RDA方法及試劑盒

提供的試劑盒可省去核酸提取步驟，在恒溫條件下20min內(nèi)實(shí)現(xiàn)犬瘟熱病毒（CDV）的檢測，特異性為100％，與普通PCR方法相比，RDA熒光法在恒溫下反應(yīng)，不需變溫，不需復(fù)雜儀器，而且反應(yīng)時(shí)間短，適用于現(xiàn)場快速檢測。本發(fā)明的方法及其試劑盒具有操作簡單、快速、特異性好、靈敏度高、成本低廉等特點(diǎn)，可為犬瘟熱病毒（CDV）現(xiàn)場快速檢測篩查提供有效的技術(shù)手段，具有廣闊的應(yīng)用前景。

16    綠原酸在制備預(yù)防和/或治療犬細(xì)小病毒病和犬瘟熱的藥物或飼料添加劑中的用途

藥物對(duì)犬細(xì)小病毒病痊愈率為67％，顯效率為33％，總有效率為100％；施用本發(fā)明以綠原酸作為唯一活性成分制得的藥物后，患犬瘟熱的病犬體溫、精神、食欲和糞便狀態(tài)均明顯改善，本發(fā)明的藥物對(duì)對(duì)犬瘟熱的痊愈率為58％，顯效率為25％，總有效率為83％。綠原酸作為唯一活性成分在制備預(yù)防和/或治療細(xì)小病毒病和犬瘟熱的藥物或飼料添加劑中具有良好的應(yīng)用前景。

17    一種犬瘟熱病毒疫苗株、疫苗及其制備方法

其微生物保藏號(hào)是CGMCC No.19397。該疫苗株毒力低，免疫原性良好。本發(fā)明還公開了以前述犬瘟熱疫苗株為免疫原的活疫苗組合物。該疫苗組合物安全有效。

18    放線菌酮在制備治療犬瘟熱病藥物中的用途

放線菌酮能顯著改善犬瘟熱病毒導(dǎo)致的正常Vero細(xì)胞病變，且對(duì)Vero細(xì)胞無明顯毒性作用，其對(duì)犬瘟熱病毒的抑制EC50值為1.429μM。因此，放線菌酮在抑制犬瘟熱病毒方面效果確切，可單獨(dú)或與其它抗犬瘟熱病毒藥物組合后用于制備犬瘟熱病毒抑制劑或犬瘟熱病治療藥物。

19    霉酚酸或其衍生物在制備犬瘟熱病毒抑制劑中的用途

結(jié)果表明：霉酚酸能顯著改善犬瘟熱病毒導(dǎo)致的正常Vero細(xì)胞病變，且對(duì)Vero細(xì)胞無明顯毒性作用，其對(duì)犬瘟熱病毒的抑制EC50值為2.752μM。因此，霉酚酸及其衍生物在抑制犬瘟熱病毒方面效果確切，可單獨(dú)或與其它抗犬瘟熱病毒藥物組合后用于制備犬瘟熱病毒抑制劑或犬瘟熱病治療藥物。

20    分泌抗犬瘟熱病毒H蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞2D12株

用CDV疫苗株或野毒株的中和抗原表位建立間接ELISA方法鑒別檢測CDV疫苗株或野毒株產(chǎn)生的抗血清；將CDV野毒株中和抗原表位與犬細(xì)小病毒VP2蛋白融合表達(dá)，免疫小鼠產(chǎn)生的抗血清可中和CDV野毒株和犬細(xì)小病毒，可用于疫苗制備。本發(fā)明單克隆抗體2D12、中和抗原表位為CDV野毒株與疫苗株的鑒別診斷試劑盒和犬瘟熱病毒疫苗研制奠定基礎(chǔ)。

21    犬瘟熱病毒納米PCR檢測試劑盒及其應(yīng)用

納米PCR檢測方法只能針對(duì)犬瘟熱病毒實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，而不能擴(kuò)增犬副流感病毒、狂犬病病毒、犬冠狀病毒、犬細(xì)小病毒和犬腺病毒I型II型。因此，本發(fā)明建立的納米PCR檢測方法具有快速、特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)，為臨床和實(shí)驗(yàn)室檢測犬瘟熱病毒提供了新的技術(shù)手段。

22    用于快速檢測犬瘟熱病毒的引物組、熒光可視化RT-LAMP試劑盒及方法

制備的RT?LAMP試劑盒可實(shí)現(xiàn)對(duì)犬瘟熱病毒的高靈敏度和高特異性檢測，檢測靈敏度為10copies，同時(shí)檢測方法操作簡便，成本較低，設(shè)備適用范圍廣，可用于現(xiàn)場快速檢測核酸，及時(shí)篩查，檢測結(jié)果可肉眼直接觀察，不需進(jìn)行電泳，熒光檢測LAMP即可獲知檢測結(jié)果。

23    一種用于犬瘟熱病毒基因檢測的引物、探針及檢測試劑盒 

與現(xiàn)有技術(shù)相比降低了不同基因型RNA病毒檢測的引物探針設(shè)計(jì)難度，應(yīng)用本發(fā)明方法使用一套引物探針系統(tǒng)檢測6個(gè)基因型犬瘟熱病毒；極大地降低了設(shè)計(jì)難度，與目前常用的多重PCR相比，降低引物和探針間影響因素，降低檢測成本，最大限度保證診斷能力，方便臨床使用。

24    犬瘟熱病毒CDV-3株感染性cDNA克隆及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

將犬瘟熱病毒CDV?3株感染性cDNA克隆和三個(gè)輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得拯救后的重組CDV?3病毒(rCDV?3)。研究發(fā)現(xiàn)，獲得的rCDV?3病毒滴度最高達(dá)到107.667TCID50/mL，比wtCDV?3高出10倍。rCDV?3感染Vero細(xì)胞后，于感染后36h迅速達(dá)到最高病毒滴度，而wtCDV?3于感染后72h時(shí)病毒含量達(dá)到最高。本發(fā)明的提出為犬瘟熱病毒新型疫苗研制、致病機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。

25    表達(dá)犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白的重組狂犬病病毒及其應(yīng)用    本發(fā)明提供一種表達(dá)犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白的重組狂犬病病毒及其應(yīng)用。所述重組狂犬病病毒是以狂犬病病毒SRV9株為骨架，將犬瘟熱病毒H基因以及犬瘟熱病毒F基因分別插入狂犬病病毒SRV9cDNA全長的P基因和M基因之間，或者N基因與P基因之間，或者M(jìn)基因與G基因之間，或者G基因與L基因之間，最后通過反向遺傳操作技術(shù)拯救分別獲得重組狂犬病病毒株SRV9?CDVH和SRV9?CDVF。將所制備的重組病毒滅活后，輔以佐劑制得表達(dá)犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白的重組狂犬病病毒滅活疫苗，免疫動(dòng)物后能誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的狂犬及犬瘟熱抗體效價(jià)。本發(fā)明制備的疫苗具有理想的免疫原性、安全性高的優(yōu)點(diǎn)。

26    一種大熊貓犬瘟熱病毒的異源抗體及其制備方法

該方法通過利用來源、背景清楚的大熊貓犬瘟熱病毒強(qiáng)毒株制備免疫用滅活疫苗，使用該滅活疫苗多次免疫健康馬匹獲得馬的免疫血清，進(jìn)一步通過鹽析、酶切、層析等純化方法，獲得純化抗體，用于大熊貓犬瘟熱的預(yù)防和治療。

27    犬瘟熱、犬細(xì)小病毒病、狂犬病三聯(lián)亞單位疫苗

重組犬瘟熱病毒H蛋白、重組犬細(xì)小病毒VP2蛋白以及重組狂犬病病毒G蛋白都是經(jīng)昆蟲細(xì)胞密碼子優(yōu)化后的序列，其核苷酸序列分別為SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4。本發(fā)明制備的亞單位疫苗免疫犬后能夠快速產(chǎn)生特異性抗體，可用于預(yù)防犬的犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒以及狂犬病病毒的感染。

28    犬腺病毒II型、犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬副流感病毒的四重實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測

用于同時(shí)鑒別檢測犬腺病毒II型、犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬副流感病毒的試劑盒。利用該試劑盒的檢測操作簡便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，不僅可以用于對(duì)犬腺病毒II型、犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬副流感病毒進(jìn)行定性鑒別檢測，還可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量，能在疫苗生產(chǎn)過程中的質(zhì)量監(jiān)控和合理化配苗中應(yīng)用。

29    一種用于大熊貓犬瘟熱病毒檢測的引物、探針及試劑盒

旨在提高檢測特異性，與犬細(xì)小病毒(CPV)、犬冠狀病毒(CCV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬輪狀病毒(CRV)等其他病毒不存在交叉反應(yīng)，在用于大熊貓犬瘟熱病毒檢測時(shí)，靈敏度高，檢出限為5×101拷貝/μL，檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠，與現(xiàn)有RT?PCR方法具有很高的符合度，可以實(shí)現(xiàn)便攜式的現(xiàn)場快速診斷。

30    一種犬瘟熱病毒干燥型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑

采用收集熒光信號(hào)的方式來檢測樣本為陽性或陰性，效率高，操作簡單，并且檢測結(jié)果需滿足必要的條件，具有成本低廉、方便、快速及試驗(yàn)條件要求低的特點(diǎn)，不僅提高了檢測效率，而且也保證了檢測的精確度。

31    貉細(xì)小病毒性腸炎、犬瘟熱二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法

針對(duì)貉犬瘟熱、細(xì)小病毒二聯(lián)活疫苗存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)，而市場上使用的二聯(lián)滅活疫苗普遍存在貉細(xì)小病毒滅活后免疫效力較低問題，提供了一種由貉細(xì)小病毒VP2蛋白與病毒含量較高的犬瘟熱病毒滅活抗原制備的二聯(lián)滅活疫苗。該二聯(lián)苗可同時(shí)應(yīng)用于貉細(xì)小病毒性腸炎和犬瘟熱兩種疾病的預(yù)防，具有免疫原性好、安全性高、可控性強(qiáng)、培養(yǎng)效率和自動(dòng)化程度高、可規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)勢，可達(dá)到“一針兩防”目的，具有廣闊的應(yīng)用前景。

32    一種對(duì)于犬瘟熱病毒及抗體的ELISA檢測方法 

利用犬瘟熱病毒N蛋白在制備犬瘟熱檢測試劑盒，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發(fā)明僅使用犬瘟熱病毒的N蛋白作為抗原建立ELISA檢測方法，N蛋白作為犬瘟熱病毒保守蛋白具有較好的抗原性，其能夠在防止病毒擴(kuò)散的前提下對(duì)于血清樣品中的抗犬瘟熱病毒抗體進(jìn)行量化，檢測血液來源機(jī)體對(duì)于犬瘟熱病毒的免疫狀態(tài)或是細(xì)胞所分泌犬瘟熱病毒的免疫水平，相比較于其他產(chǎn)品更為安全高效，對(duì)于犬瘟熱病毒的基礎(chǔ)研究以及臨床檢測具有積極意義。

33    快速檢測犬瘟熱病毒抗原的檢測卡及其制備方法

（1）犬瘟熱病毒的分離、培養(yǎng)、純化；（2）抗犬瘟熱病毒配對(duì)單克隆抗體的制備，包括免疫程序、細(xì)胞融合、雜交瘤篩選及克隆化、抗體制備及純化；（3）犬瘟熱病毒快速檢測膠體金檢測卡及其制備方法，包括樣品墊處理、噴膜、C,T線確定、被測樣本的處理、檢測卡性能測定。本發(fā)明可以快速、靈敏、準(zhǔn)確的定性檢測國內(nèi)犬瘟熱病毒，克服了國內(nèi)檢測犬瘟熱病毒膠體金檢測卡開發(fā)用的配對(duì)單抗為進(jìn)口原料，進(jìn)口原料的單抗以某個(gè)國家分離的當(dāng)前病毒制備，克服了檢測過程中因地域遙遠(yuǎn)病毒變異漏檢的現(xiàn)象。

34    一種嵌合犬瘟熱病毒主要免疫基因的重組狂犬病病毒及其應(yīng)用

該重組病毒是以狂犬病病毒SAD?B19株為骨架，將SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的CDV?F和CDV?H基因分別插入重組質(zhì)粒SAD?19全長cDNA的N基因和P基因之間，最后通過反向遺傳操作技術(shù)，拯救出重組狂犬病病毒株BNSP?CDV?F和BNSP?CDV?H。上述重組病毒BNSP?CDV?F和BNSP?CDV?H可表達(dá)犬瘟熱病毒的融合蛋白和血凝素蛋白，將上述重組病毒混合制備的疫苗免疫動(dòng)物后，能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的抗狂犬病病毒抗體與抗犬瘟熱病毒主要免疫基因抗體，還可以降低疫苗成本，具有很好的推廣應(yīng)用前景。

35    法匹拉韋在制備抑制犬瘟熱病毒增殖藥物中的應(yīng)用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，法匹拉韋(T?705)加入到感染CDV?3及CDV?11的Vero及DH82細(xì)胞中，均能產(chǎn)生明顯的病毒抑制作用，體現(xiàn)出良好的抗病毒功效。且隨藥物濃度的增加，抗病毒效果逐漸增強(qiáng)。細(xì)胞感染病毒后12?48h加入藥物，仍能發(fā)揮顯著的抗病毒功效，證明了法匹拉韋(T?705)暴露后用藥對(duì)不同動(dòng)物來源的CDV都具有很好的抑制效果。

36    犬瘟熱病毒復(fù)制缺陷毒株及其構(gòu)建方法

本研究所述的犬瘟熱病毒流行毒株復(fù)制缺陷毒株為新型犬瘟熱基因工程生物防治制劑的研制創(chuàng)造了便利條件及犬瘟熱病毒相關(guān)基礎(chǔ)研究提供了極佳的技術(shù)平臺(tái)。

37    犬瘟熱病毒弱毒疫苗株及其應(yīng)用 

將所分離的犬瘟熱病毒在Vero細(xì)胞上傳代、克隆，培育了弱毒疫苗株(HBa株)，致病性試驗(yàn)和免疫原性試驗(yàn)結(jié)果表明，犬瘟熱病毒HBa株對(duì)水貂和犬均不致病，且對(duì)其它來源強(qiáng)毒攻擊可以提供很好的保護(hù)力。本弱毒疫苗株具有良好的免疫原性，可制成單苗或聯(lián)苗，可有效預(yù)防由犬瘟熱病毒所致疾病，還可應(yīng)用于制備治療、診斷或檢測犬瘟熱病毒所致疾病試劑或試劑盒。本弱毒疫苗株具有遺傳性穩(wěn)定，具有免疫持久、效果好、安全可靠、保存期長等優(yōu)點(diǎn)。

38    馬抗犬瘟熱病毒免疫球蛋白F(ab’)2及制備方法

高效、安全、可靠的馬抗犬瘟熱病毒特異性精制免疫球蛋白，用于治療犬瘟熱病毒所引起的犬瘟熱病毒病的有效藥物，對(duì)犬瘟熱病毒感染動(dòng)物具有顯著療效，明顯提高感染動(dòng)物的存活率。本發(fā)明的制備工藝采用獨(dú)特的工藝參數(shù)控制，用常規(guī)的分離法生產(chǎn)出所述特異性免疫球蛋白，產(chǎn)品安全可靠。用于制備馬抗犬瘟熱病毒特異性精制免疫球蛋白F(ab′)2的原料血漿有穩(wěn)定高效的來源，能滿足血漿的供給。

39    一種預(yù)防犬瘟熱的shRNA重組腺相關(guān)病毒

預(yù)防犬瘟熱的shRNA重組腺相關(guān)病毒，由AAV2/9?N?shRNA3質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV?293細(xì)胞后得到shRNA重組腺相關(guān)病毒；所述干擾片段序列的Top strand如SEQ ID NO.7所示，bottom strand如SEQ ID NO.8所示；所述AAV2/9?N?shRNA3質(zhì)粒，由經(jīng)BamHI和EcoRI雙酶切的pHBAAV?U6?CMV?ZsGreen載體與干擾片段基因連接、轉(zhuǎn)化后構(gòu)建而成，并研究AAV2/9?N?shRNA3對(duì)預(yù)防犬瘟熱的效果。

40    一種驢源犬瘟熱病毒免疫球蛋白G的制備方法 

對(duì)青年健康驢用犬瘟熱滅活疫苗接種免疫，每次免疫后檢測抗體滴度和中和抗體效價(jià)，當(dāng)抗體滴度達(dá)到1:10000以上、中和抗體效價(jià)達(dá)到1:256以上時(shí)，靜脈采血，分離血清，提取、純化免疫球蛋白G。該方法制備所得的免疫球蛋白G可用于臨床治療犬瘟熱病毒病，有效率可達(dá)100％，治愈率可達(dá)85％以上，解決了犬瘟熱病毒抗血清或抗體來源不足的問題。

41    一種犬瘟熱病毒抗體的化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒 

包被了犬瘟熱病毒抗原的毛細(xì)管、酶標(biāo)犬瘟熱病毒抗原、發(fā)光底物和洗滌液。本發(fā)明靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、操作方法簡便且上樣量小，需要的血清樣本量小。

42    一種犬瘟熱、犬細(xì)小病毒檢測試劑盒 

犬瘟熱、犬細(xì)小病毒檢測試劑盒采用時(shí)間分辨檢測技術(shù)，提高了檢測靈敏度，能同時(shí)檢測犬瘟熱、犬細(xì)小兩種疫病，給使用者提供了方便且降低了使用成本，檢測的批間和批內(nèi)差異小，性能穩(wěn)定。

43    適合犬瘟熱病毒和禽流感病毒增殖的MDCK-KOmavs細(xì)胞系及應(yīng)用

所構(gòu)建的MDCK?KOmavs細(xì)胞系具有犬瘟熱病毒和禽流感病毒感染后細(xì)胞病變快、病毒增殖滴度高、更適合犬瘟熱病毒和禽流感病毒病毒增殖等特點(diǎn)。

44    一種犬瘟熱細(xì)小病毒二聯(lián)亞單位疫苗

犬瘟熱細(xì)小病毒二聯(lián)亞單位疫苗具有穩(wěn)定的生物學(xué)特性，且具有良好的免疫原性，安全可靠，對(duì)犬瘟熱強(qiáng)毒GN株攻毒以及犬細(xì)小病毒QN株的攻毒具有非常好的保護(hù)效果，能夠有效的預(yù)防犬瘟熱與細(xì)小病毒的流行和傳播，降低這兩種病造成的經(jīng)濟(jì)損失，有著廣闊的應(yīng)用前景。

45    用于檢測檢測犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬冠狀毒病毒的引物組、試劑盒及檢測方法

還提供了基于所述引物組、試劑盒以及用于檢測犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬冠狀毒病毒的方法。采用本發(fā)明所述的引物組、試劑盒和/或方法檢測犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒和犬冠狀毒病毒，具有特異性好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、簡捷高效等優(yōu)點(diǎn)，為臨床檢測提供了可靠的技術(shù)手段。

46    河豚毒素在制備治療犬瘟熱的藥物組合物中應(yīng)用、藥物組合物、制備方法及藥物制劑

治療犬瘟熱的河豚毒素藥物組合物的制備方法以及上述治療犬瘟熱的河豚毒素藥物組合物制成的藥物制劑。本發(fā)明的藥物組合物含有河豚毒素，治療效果顯著，無毒副作用，不產(chǎn)生耐藥性。

47    一種一步法定量檢測犬瘟熱病毒-犬細(xì)小病毒抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒

檢測犬瘟熱病毒?犬細(xì)小病毒抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，由抗犬IgG免疫磁珠、熒光反應(yīng)液、樣本處理液、洗滌液組成；其中，所述的熒光反應(yīng)液為不同熒光標(biāo)記的犬細(xì)小病毒抗原和犬瘟熱病毒抗原溶液。本發(fā)明的檢測試劑盒可快速、準(zhǔn)確的同時(shí)鑒別診斷犬瘟熱病毒抗體和犬細(xì)小病毒抗體水平，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡便等特點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。

48    一種犬瘟熱基因工程亞單位疫苗

犬瘟熱亞單位疫苗具有穩(wěn)定的生物學(xué)特性，且具有良好的免疫原性，安全可靠，對(duì)犬瘟熱強(qiáng)毒GN株攻毒的水貂具有非常好的保護(hù)效果，免疫后水貂疫苗，能夠有效的預(yù)防水貂犬瘟熱的流行和傳播，降低本病造成的經(jīng)濟(jì)損失，有著廣闊的應(yīng)用前景。

49    一種犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條及其制備方法和應(yīng)用

試紙條具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡單、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)犬瘟熱病毒抗體現(xiàn)場快速定量檢測。

50    用于鑒別犬瘟熱病毒野毒株與疫苗株的AS-PCR引物及其應(yīng)用

還提供了采用所述AS?PCR引物用于鑒別犬瘟熱病毒野毒株與疫苗株的的方法；該引物采用3端錯(cuò)配原則對(duì)Asia?I型和疫苗株進(jìn)行鑒別：對(duì)Asia?I檢測結(jié)果均為陽性，而疫苗株則均為陰性，能夠準(zhǔn)確區(qū)分CDV中Asia?I和疫苗株，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

51    用于檢測犬瘟熱病毒抗體的時(shí)間分辨熒光免疫試劑盒

試劑盒包括包被有犬瘟熱病毒重組抗原的酶聯(lián)板、銪標(biāo)記的犬瘟熱病毒重組抗原溶液、分析緩沖液，洗滌液和增強(qiáng)液，犬瘟熱病毒重組抗原與犬瘟熱病毒抗體能特異性結(jié)合。本發(fā)明試劑盒采用雙抗原夾心法，檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性更高。

52    用于鑒別犬瘟熱病毒野毒株與疫苗株的Taqman探針熒光定量PCR檢測試劑盒及應(yīng)用 

實(shí)驗(yàn)證明，使用本發(fā)明建立的Taqman探針熒光定量PCR檢測試劑盒檢測鑒別CDV野毒株和疫苗株，靈敏度可達(dá)1個(gè)拷貝，能檢測出的病毒量低至1TCID50/mL，高于常規(guī)PCR方法的103和102個(gè)拷貝，且與5種其他病原核酸檢測均呈陰性。因此，使用本發(fā)明建立的試劑盒鑒別CDV野毒株和疫苗株具有特異性強(qiáng)、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，能夠快速鑒別出犬瘟熱病毒野毒株和疫苗株感染。

53    用于檢測犬瘟熱病毒抗原的免疫熒光層析檢測卡與制備方法

技術(shù)要點(diǎn)包括底板，在底板上依次銜接有樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維膜和吸水墊,所述結(jié)合墊上設(shè)有熒光微球標(biāo)記的CDV單克隆抗體和熒光微球標(biāo)記的羊抗雞IgY，所述的硝酸纖維膜設(shè)有一條包被雞IgY的質(zhì)控C線，以及一條包被CDV單克隆抗體的檢測T線；屬于動(dòng)物疫病檢測領(lǐng)域。

54    一種犬瘟熱病毒可視化核酸檢測方法

可視化快速檢測方法，融合了免疫層析技術(shù)和分子生物學(xué)手段，結(jié)合LAMP擴(kuò)增效率高和橫向測流試紙條便于觀察結(jié)果，使檢測結(jié)果更具有直觀性，具有可視化、快速診斷、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，解決傳統(tǒng)檢測方法操作繁瑣、敏感性、特異性低的缺陷，本發(fā)明檢測方法適用于臨床診斷、食品安全和動(dòng)物疾病檢測等領(lǐng)域。

55    用于犬瘟熱病毒檢測的引物和探針及其用途

引物和探針特異性強(qiáng)，僅對(duì)犬瘟熱病毒檢測呈陽性，對(duì)其它病毒均呈陰性，靈敏度高，檢出限為9.4×101拷貝。本發(fā)明方法可以有效應(yīng)用于犬瘟熱疫情的現(xiàn)場診斷，操作簡單，反應(yīng)時(shí)間短，對(duì)于經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)裝備較差的實(shí)驗(yàn)室，對(duì)于犬瘟熱疫情現(xiàn)場和野外現(xiàn)場診斷中，將具有非常光明的應(yīng)用前景。

56    貉犬瘟熱活疫苗及其制備方法和應(yīng)用 

該弱毒疫苗株是本發(fā)明發(fā)明人通過貉體連續(xù)傳代的方式，從犬瘟熱疫苗株CDV?O2中馴化獲得的一株對(duì)貉安全、免疫原性良好、滴度穩(wěn)定的犬瘟熱弱毒疫苗株，命名為CDV?OR12株，其微生物保藏號(hào)為CGMCC NO.13793。實(shí)驗(yàn)證明，該疫苗可有效保護(hù)貉免于犬瘟熱病毒強(qiáng)毒的攻擊，保護(hù)率在90％以上，能夠有效預(yù)防貉犬瘟熱的發(fā)生，免疫期為6個(gè)月。本發(fā)明的提出為貉犬瘟熱的防控提供了一種新的技術(shù)手段。

57    預(yù)防或治療犬瘟熱的寡聚核酸組合及其應(yīng)用  

提供的寡聚核酸組合的應(yīng)用為如下任一種：(b1)抑制犬瘟熱病毒核酸復(fù)制；(b2)制備用于治療犬瘟熱的藥物；(b3)抑制犬瘟熱病毒生長；(b4)制備用于預(yù)防犬瘟熱發(fā)生或傳播的藥物的藥物；(b5)促進(jìn)犬瘟熱病毒死亡或滅活。實(shí)驗(yàn)證明，利用本發(fā)明提供的寡聚核酸組合，可抑制犬瘟熱病毒復(fù)制，對(duì)預(yù)防或治療犬瘟熱具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

58    一種分泌抗犬瘟熱病毒H蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞3B5株

比單獨(dú)使用3B5、1D7、2G3的中和效價(jià)提高8?32倍中和病毒能力，單克隆抗體組合治療劑的臨床應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果比聯(lián)合使用單克隆抗體1D7和2G3效果從98％提高到100％，治療周期從4天縮短為2天。可用于犬瘟熱(CD)發(fā)病動(dòng)物的臨床治療，降低生產(chǎn)成本，提高治療效果。

59    基于水貂源Nectin4受體的犬瘟熱病毒敏感細(xì)胞系、制備方法和應(yīng)用

基于水貂源Nectin4受體的犬瘟熱病毒敏感細(xì)胞系，保藏編號(hào)為CGMCC NO.17413。該細(xì)胞系為可以穩(wěn)定表達(dá)水貂源Nectin4基因的Vero細(xì)胞系，細(xì)胞的犬瘟熱病毒敏感性更好，分離的病毒效價(jià)穩(wěn)定，不會(huì)發(fā)生適應(yīng)性突變和毒力致弱的問題。本發(fā)明提供的制備方法，將含有優(yōu)化水貂源Nectin4基因的轉(zhuǎn)基因載體引入宿主細(xì)胞，篩選得到表達(dá)水貂源Nectin4受體的犬瘟熱病毒敏感細(xì)胞系，其中，所用優(yōu)化水貂源Nectin4基因的序列如SEQ ID NO.1所示。該方法操作簡便，安全性高。

60    一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對(duì)、引物和探針組合物、試劑及試劑盒  

具有在具備溫控功能的熒光檢測儀器中，在42℃等溫條件下對(duì)犬瘟熱病毒進(jìn)行快速、實(shí)時(shí)、靈敏、準(zhǔn)確、便捷的檢測的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明相比傳統(tǒng)PCR法更為便捷、快速，在沒有實(shí)驗(yàn)室條件的寵物店、小型寵物診所做到對(duì)犬瘟熱病毒進(jìn)行便捷、快速和精確的檢測。

61    犬瘟熱病毒熒光EMA檢測引物組、試劑盒和檢測方法 

所述檢測包含使用所述試劑盒進(jìn)行常溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，通過M?MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Rnase抑制劑、DNA解旋酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白、DNA聚合酶等多個(gè)酶促反應(yīng)，可在37?45℃恒溫條件下，10?30分鐘內(nèi)使待檢RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，并將cDNA擴(kuò)增數(shù)百萬倍，配合熒光檢測技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)待檢RNA的快速檢定。本發(fā)明操作簡單、時(shí)間短、儀器要求低，適合用于寵物傳染性疾病的快速診斷。

62    一種用微載體懸浮培養(yǎng)犬瘟熱病毒的方法 

與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)繁殖病毒的工藝相比，自動(dòng)化程度較高，生產(chǎn)時(shí)可控，節(jié)省人力，降低成本，生產(chǎn)用地少，規(guī)模易于擴(kuò)大，生產(chǎn)病毒滴度高，批間差異小，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

63    犬瘟熱病毒抗體快速定量檢測卡及使用方法 

所述硝酸纖維素膜上包被犬瘟熱病毒H蛋白抗原為檢測線，包被兔抗雞lgY抗體為質(zhì)控線，標(biāo)記物為標(biāo)記有犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白H蛋白重組抗原的熒光檢測微球和標(biāo)記雞lgY抗體的熒光質(zhì)控微球。本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)犬瘟熱病毒抗體現(xiàn)場快速定量檢測，具有較高的實(shí)用價(jià)值和推廣價(jià)值。

64    一種制備水貂犬瘟熱抗原蛋白復(fù)合物的方法、抗原蛋白復(fù)合物及其應(yīng)用 

用低血清培養(yǎng)基懸浮VeroE6?TY株細(xì)胞培養(yǎng)馴化水貂犬瘟熱病毒，馴化后的病毒接種到低血清懸浮VeroE6?TY株細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)增殖后收獲毒液，制備水貂犬瘟熱抗原蛋白復(fù)合物。本發(fā)明使得水貂犬瘟熱抗原蛋白復(fù)合物實(shí)現(xiàn)了從轉(zhuǎn)瓶貼壁培養(yǎng)向大規(guī)模細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的轉(zhuǎn)變，這不僅簡化了生產(chǎn)工藝，降低了生產(chǎn)成本，還大大提高了產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量。